影响灭菌效果的因素
1、环境因素对耐热性的影响：环境因素会在形成芽孢的过程中影响孢子的耐热性，包括水分、pH、离子以及芽孢是否处于包藏态等。
2、真空度：饱和蒸汽冷凝时会释放出潜热传递给被灭菌物品，加速了微生物的死亡。如果灭菌器的真空度不够，空气排出不完全而混在蒸汽中，在相同的压力下其温度会低于饱和蒸汽，混入的空气越多温度越低，无法达到灭菌的温度要求。
3、 蒸汽质量：蒸汽质量除了与蒸汽的饱和度相关还由干燥度决定。过湿的蒸汽含液态水过多，导致不饱和蒸汽的产生，释放潜热少并可能产生湿包；过干的蒸汽不含液态水，在获得能量后变为过热蒸汽而非饱和蒸汽，穿透性差，灭菌效果不好。
4、灭菌物品的装载：装载时要求待灭菌物品在灭菌车层码放好，装载量要少于灭菌器容量的80%，保证每个包裹周围要留有空隙，避免重叠，利于蒸汽流通扩散。
使用脉动真空灭菌器时对灭菌物品的要求及注意事项
1、 物品器械必须洗涤处理后进行灭菌。
2 、器械包和物品包体积不得超过30×30×50cm。
3 、物品包捆扎不宜过紧，外用化学指示胶带贴在包外，包内放包内化学指示卡。
4 、装填里不得超过柜室容积的99%，同时又不得小于柜室容积的5%，以防止“小装量效应”，残留空气影响灭菌效果。
5 、铝饭合与搪瓷合，不得用于装放灭菌物品，应用带通气孔的器具装放，以免响灭菌效果，以及热气因无法排除而令合内潮湿，无法炽干。
6、 所消物品均应打包，有盖方合应用包布包好，否则既影响美观，又容易碰翻造成污染。
脉动真空灭菌器原理
利用饱和蒸汽在冷凝时释放出大量潜热的物理特性，使待灭菌的物品处于高温和潮湿的状态，经过一段时间的保温从而达到灭菌的目的。利用的是高温饱和蒸汽穿透力强的特性。
为了保证物品无菌,脉动真空灭菌器广泛应用于医疗卫生及工业领域。在实验动物的饲养生产单位，脉动真空灭菌器运用饱和蒸汽在冷凝时释放大量潜热达到灭菌目的，被公认是灭菌能力强，高效可靠，操作方便，在实验动物屏障设施中应用广泛的灭菌设备。《GB14925-2010实验动物环境及设施》中要求:屏障环境应严格控制人员,物品和空气的进出。其中耐高温潮湿物品必须要经过双扉式脉动真空灭菌器灭菌后进入屏障环境。这对SPF级实验动物的质量保证是至关重要的.对灭菌机理及灭菌设备基本原理缺乏了解会对灭菌设备的正确使用，日常维护及常规监测等维持动物SPF级别的重要环节造成诸多不利因素，难以保证灭菌效果。
